1. ¼ ·Ð
°³±¸¸®³ª µµ·Õ´¨ÀÇ ¾ËÀº µé¿¡¼ ºñ±³Àû ½±°Ô ±¸ÇÒ ¼ö ÀÖ°í ¸Å¿ì Ä¿ °üÂûÀÌ ¿ëÀÌÇϸç, ½ÇÇèÀûÀÎ Á¶ÀÛÀ» ½±°Ô ÇÒ ¼ö ÀÖ¾î ÈǸ¢ÇÑ ½ÇÇè Àç·á´Ù. À̵éÀÇ ¹ß»ý ¾ç»óÀº ºñ±³Àû °£´ÜÇÏ°í ¹ß»ý ¼Óµµ ¿ª½Ã °üÂûÇϱ⿡ ¾Ë¸Â±â ¶§¹®¿¡ ¾ç¼·ùÀÇ ¹ß»ýÀ» ¿¬±¸ÇÏ´Â °ÍÀº ´Ù¸¥ µ¿¹°ÀÇ ¹ß»ýÀ» ÀÌÇØÇϴµ¥ ¸¹Àº µµ¿òÀ» ÁÖ¾ú´Ù. °³±¸¸®´Â º¸Åë 3³âÀÇ »ýÈ°»ç¸¦ °¡Áö°í ÀÖ¾î ¼ºÃ¼°¡ µÇ´Âµ¥ ´Ù¸¥ ½ÇÇè µ¿¹°º¸´Ù ±ä ½Ã°£À» ÇÊ¿ä·Î ÇÑ´Ù.
¿ì¸®³ª¶óÀÇ °³±¸¸®´Â ÇöÀç ¾Èž±î°Ôµµ ¸êÁ¾ÀÇ À§±â¸¦ ¸Â°í ÀÖ¾î ±¸ÇϱⰡ ½±Áö ¾ÊÀ¸³ª ´ë½Å Ȳ¼Ò°³±¸¸®´Â ½±°Ô ±¸ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. Àü¼¼°èÀûÀ¸·Î Xenopus laevis¶ó´Â ¾ÆÇÁ¸®Ä«»ê ¹ßÅé °³±¸¸®¸¦ ½ÇÇè½Ç¿¡¼ ¸¹ÀÌ ÀÌ¿ëÇÏ°í ÀÖ´Ù. À̵éÀº ´ßÀ̳ª ¼Ò °£ µîÀ» ¸Ô±â ¶§¹®¿¡ ½ÇÇè½Ç¿¡¼ »çÀ°ÀÌ ½±°í, ¾ËÀ» 1³â¿¡ 3ȸ ÀÌ»ó ³ºÀ¸¹Ç·Î ´Ù¸¥ ¾ç¼·ù¿¡ ºñÇØ ½ÇÇèÀç·á·Î¼ ÁÁÀº ÀåÁ¡À» °¡Áö°í ÀÖ´Ù. ¾ÏÄÆÀº ¼öÄƺ¸´Ù Å©°í, ¼öÄÆÀº ¾Õ´Ù¸®¿¡ °ËÀº À°À¶(nuptial pads)À» °¡Áö°í ÀÖ´Ù.
Xenopus laevis´Â ¹ß»ýÀÇ ºÐÀÚ »ý¹°ÇÐÀû ¹× »ýÈÇÐÀû ½ÇÇèÀ» Á¢±ÙÀ» À§ÇØ ¸¹ÀÌ »ç¿ëÇÏ°í ÀÖ´Ù. 1930³â´ë¿¡ µ¶ÀÏÀÇ ½ºÆ丸Àº µîÂÊ¿¡ Çü¼ºÃ¼(organizer)¶ó´Â °÷ÀÌ ÀÖ¾î ÀÌ Áö¿ªÀ» º¹¸é Áö¿ªÀ¸·Î À̽ÄÇÏ¸é ¿ÏÀüÇÑ »õ·Î¿î ÃàÀ» Çü¼ºÇÏ´Â °ÍÀ» °üÂûÇÏ¿´´Ù. ÀÌ½ÄµÈ Á¶Á÷µéÀÌ ÁÖº¯À» º¯È½ÃÄÑ Ãà Çü¼º¿¡ °ü¿©Çϵµ·Ï À¯µµÇÑ °ÍÀÌ´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ Çö»óÀ» À¯µµÀÛ¿ë(induction)À̶ó°í ÇÑ´Ù. ¾ç¼·ù¿¡¼ Å« °ü½É»ç ÁßÀÇ Çϳª´Â ¾î¶»°Ô Ãʱ⿡´Â ¾ø´ø Á߹迱(mesoderm)ÀÌ Æ÷¹è½Ã±â¿¡ À¯µµµÇ´Â°¡ÀÌ´Ù. Á߹迱ÀÇ À¯µµ ¶ÇÇÑ ºÐÀÚÀûÀ¸·Î ¸¹Àº ¿¬±¸°¡ ÁøÇàµÇ¾ú´Ù.
Xenoups ¾ËÀÇ µ¿¹°¹Ý±¸(animal hemisphere)´Â °ËÀº ¹Ý¸é, ½Ä¹°¹Ý±¸(vegetal hemisphere)´Â ³È²ÀÌ ÀÖ¾î ¹à°Ô º¸ÀδÙ. °³±¸¸®´Â ³ÇÒ ¹æ½ÄÀÌ ÀüÇÒ(holoblastic)À̸ç, ºÎµîÇÒÀÇ Æ¯Â¡À» °®´Â´Ù. XenopusÀÇ Ã¹ ºÐ¿Àº ¼öÁ¤µÈÁö ¾à 100ºÐ ÈÄ¿¡ ÀϾ¸ç, °æÇÒ (vertical or meridional)·Î ÀϾ Á¢ÇÕÀÚ¸¦ ÁÂ¿ì ¹ÝÀ¸·Î ³ª´«´Ù. Á¦2ºÐ¿Àº ¿ª½Ã vertical·Î ÀϾ³ª ù ºÐ¿°ú´Â Á÷°¢À¸·Î ÀϾÙ. Á¦3ºÐ¿Àº À§ÇÒ (horizontal)·Î Àûµµ¸é°ú ÆòÇàÇÏ°Ô ÀϾ¸ç, ¾à°£ µ¿¹°±ØÂÊ¿¡ Ä¡¿ìÃļ ÀϾ µ¿¹°¹Ý±¸¼¼Æ÷°¡ ½Ä¹°¹Ý±¸¼¼Æ÷º¸´Ù Àû´Ù. Á¦3ºÐ¿ÀÌ ÀϾ¸é µ¿¹°¹Ý±¸¿¡ 4°³ÀÇ ¼¼Æ÷, ½Ä¹°¹Ý±¸¿¡ 4°³ÀÇ ¼¼Æ÷°¡ ÀÖ°Ô µÈ´Ù. °è¼ÓµÇ´Â ³ÇÒ·Î ¸ðµç ºÎÀ§¿¡ ¿©·¯ ¼¼Æ÷ÃþÀ» Çü¼ºÇϴµ¥ ÀÌ·¯ÇÑ ³ÇÒÀº 13¹ø ºÐ¿±îÁö µ¿½Ã¿¡ ´ëĪÀûÀ¸·Î ÀϾÙ. Æ÷¹è(blastula) ¸»±â´Â Æ÷¹è°(blastocoel)°ú ¸î °³ÀÇ ÀÛÀº ¼¼Æ÷ÃþÀ¸·Î ÀÌ·ç¾îÁø µÎÅÍ¿î Æ÷¹è° µ¤°³(roof)¸¦ °¡Áö°í ÀÖ´Ù.
Æ÷¹è°¡ ³¡³ª¸é ¹è(embryo)´Â Á¤ÀÚ°¡ µé¾î°£ ¹Ý´ëÂÊ¿¡¼ ¿ø±¸¹è¼øºÎ(dorsal lip)À» Çü¼ºÇϸç, ÀÌ °÷¿¡¼ ³¶¹è(gastrulation)°¡ ½ÃÀ۵ȴÙ. Áï ¼¼Æ÷°¡ ÀÌ°÷¿¡¼ ¾ÈÀ¸·Î ÇÔÀÔÇØ µé¾î°£´Ù. ³¶¹è´Â Á߹迱, ¿Ü¹è¿±, ³»¹è¿±ÀÌ Á¦ÀÚ¸®¸¦ ã¾Æ°¡ ÀÚ¸®¸¦ ÀâÀ¸¸ç, ±Ã±ØÀûÀ¸·Î °¢ ¹è¿±¿¡ Ư¡ÀûÀÎ ±â°üµéÀ» Çü¼ºÇÏ°Ô µÈ´Ù. ³¶¹è ½Ã±â ÈÄ¿¡´Â ±â°üÇü¼ºÀÌ ÀÌ·ç¾îÁö´Âµ¥ óÀ½À¸·Î ½Å°æ°è°¡ Çü¼ºµÈ´Ù (neurulation). ½Å°æ°è´Â ¸ÕÀú ½Å°æÆÇ(neural plate)ÀÌ Çü¼ºµÇ°í, °ð ÀÌ¾î ½Å°æ½À(neural fold)ÀÌ, ±×¸®°í ½Å°æ°ü(neural tube)ÀÌ Çü¼ºµÈ´Ù. ¿ÃìÀÌ´Â ¼ºÃ¼¿Í´Â ´Þ¸® ²¿¸®¸¦ °¡Áö°í Àִµ¥ ¹ß»ýÀÌ ÁøÇàµÇ¸é¼ ²¿¸®°¡ ¸Å¿ì ºü¸¥ ¼Óµµ·Î ÅðÈµÇ¾î ¾ø¾îÁö´Âµ¥ À̸¦ º¯ÅÂ(metamorphosis)¶ó°í ÇÑ´Ù. ÀÏÁ¾ÀÇ programmed cell death¿¡ ÀÇÇØ »ç¶óÁø´Ù.
º» ½ÇÇè¿¡¼´Â ¾ç¼·ù ¹ß»ýÀÇ ¿ªµ¿ÀûÀÎ ¸ð½ÀÀ» °üÂûÇÏ¿© ¹ß»ýÀÇ ¿ÜÇüÀûÀΠƯ¡À» °øºÎÇÏ°í ¶ÇÇÑ ½½¶óÀ̵å Ç¥º»À» ÅëÇØ ³»ºÎ ±¸Á¶°¡ ¹ß»ýÀÌ ÁøÇàµÇ¸é¼ ¾î¶»°Ô º¯ÇØ°¡´ÂÁö ¾Ë¾Æº»´Ù. ¶ÇÇÑ Ãʱâ¹è¿Í ¿ÃìÀÌ ´Ü°è¿¡¼ Á¶ÀÛÀûÀÎ ½ÇÇèÀ» ÅëÇØ ¹ß»ýÀÇ ±âÀÛÀ» ÀÌÇØÇÑ´Ù.
|
2. ½ÇÇèÀç·á
°íÁ¤µÈ Xenopus ¹è, Xenopus ¹è¿¡ ´ëÇÑ ½½¶óÀ̵åÇ¥º», »ì¾ÆÀÖ´Â Xenopus ¹è¾Æ, äÁýÇÑ °³±¸¸® ¹è¾Æ ¹× µµ·æ³ó ¹è¾Æ(À¯¸í»ê°è°î) Felcon dish, ÇɼÂ, ÇغÎÇö¹Ì°æ, ±¤ÇÐÇö¹Ì°æ, Steinberg's solution (pH 7.4), dejelly solution, agar plate, test tube, Petri dish, Syringe, Needle, Tungsten needle, Human chorionic gonadotropin (HCG) (LGÈÇÐ or ½Ã±×¸¶),
100%, pH7.4 500ml 1000ml NaCl 60mM KCl 0.67mM Ca(NO3)2 0.34mM MgSO4 0.83mM HEPES 10mM
2% cystein solution (pH7.8-8.0) »ç¿ë Á÷Àü Áغñ L-cystein 1.0g Tris 0.345g NaOH 2 grains ¸ÕÀú 40ml Á¤µµÀÇ Áõ·ù¼ö¸¦ ³Ö°í ³ìÀÎ ÈÄ pH7.8-8.0À¸·Î ¸ÂÃá´Ù. pH¸¦ ¸ÂÃá ÈÄ ÃÑ 50mlÀÌ µÇµµ·Ï ¹°À» º×´Â´Ù. ½ÇÇèÀ» Çϱâ 3ÀÏÀü¿¡ °³±¸¸®¸¦ ¹Þ¾Æ »õ·Î¿î ȯ°æ¿¡ ÀûÀÀÀ» ½ÃŲ´Ù. XenopusÀÇ ¸ÔÀÌ´Â ´ß°£ ȤÀº ¼Ò°£À» °¡´Ã°Ô ½ä¾î¼ ÇɼÂÀ¸·Î Áý¾î ¸ÔÀδÙ.
3. ½ÇÇè¹æ¹ý
1) Àΰø ¹è¶õ ¹× Àΰø¼öÁ¤
¨ç Àû¾îµµ 3°³¿ù À̳»¿¡ ¾ËÀ» ³ºÀº ÀûÀÌ ¾ø´Â ¼º¼÷ÇÑ ¾ÏÄÆÀ» °ñ¶ó »ç¿ë 12½Ã°£ Àü¿¡ µîÂÊ ¸²ÇÁ ÁÖ¸Ó´Ï, º¹°, ȤÀº Çã¹÷Áö¿¡ 450IUÀÇ HCG¸¦ ÁÖ»çÇÑ´Ù. ¨è ÁÖ»çÇÑ ´ÙÀ½³¯ (12-24½Ã°£ ÈÄ) º¹ºÎ¸¦ °¡º±°Ô ´·¯ ¹è¶õÀ» È®ÀÎÇÑ´Ù. ¨é Ãѹ輳°¿¡¼ ¾ËÀÌ ³ª¿À´Â °ÍÀ¸·Î ¹è¶õÀÌ È®ÀÎµÇ¸é ¼öÄÆÀÇ Á¤¼Ò¸¦ ÃëÇÏ¿© 1.5mlÀÇ ice-cold 100% Steinberg ¿ë¾×¿¡¼ ÆļâÇÑ´Ù. ¨ê Á¤Ãæ ÇöŹ¾× ÇÑ ¹æ¿ïÀ» ½½¶óÀ̵å À§¿¡ ¶³¾î¶ß·Á Çö¹Ì°æÀ¸·Î °üÂûÇÏ°í Á¤ÃæÀÇ È°¼ºÈ Á¤µµ¸¦ È®ÀÎÇÑ´Ù. ¨ë Á¤ÃæÀÌ È°¹ßÇÏ°Ô ¿òÁ÷ÀÌ´Â °ÍÀÌ È®ÀεǸé Á¤Ãæ ÇöŹ¾×À» ¾óÀ½ À§¿¡¼ Â÷°Ô º¸°üÇÏ°í, ¹è¶õÀÌ È®ÀÎµÈ ¾ÏÄÆÀÇ º¹ºÎ¸¦ Á¶½É½º·´°Ô ´·¯ Petri dish¿¡ ¾ËÀ» ¹Þ´Â´Ù. ¨ì 0.25mlÀÇ Á¤Ãæ ÇöŹ¾×À» Áõ·ù¼ö·Î 20¹è Èñ¼®ÇÏ¿© ¾à 200-300°³ÀÇ ¾Ë À§¿¡ °í·ç »Ñ¸®°í ÆäÆ®¸® µð½¬¸¦ Èçµé¾î ¾ËµéÀÌ ÇϳªÀÇ ÃþÀ¸·Î ÆîÃÄÁö°Ô ÇÑ´Ù. ¨í 10ºÐ °¡·® °æ°úÇÑ ÈÄ ¼öÁ¤¶õ¿¡ 20% Steinberg ¿ë¾×À» ºÎ¾î Á©¸®ÃþÀÌ ºÎÇ®µµ·Ï ÇÑ´Ù.
2) °íÁ¤µÈ Xenopus ¹è¾ÆÀÇ °üÂû
¨ç °íÁ¤µÈ ¹è¸¦ °üº´¿¡¼ ²¨³»¾î pelcon dish¿¡ ³Ö°í °üÂûÇÑ´Ù. ¨è °üÂûÀÌ ³¡³ª¸é ´Ù½Ã °üº´¿¡ ³Ö¾î ´Ù½Ã ÀÌ¿ëÇÒ ¼ö ÀÖµµ·Ï ÇÑ´Ù. ¨é ¹èÀÇ °üÂû½Ã ¾Æ·¡ÀÇ ±×¸²°ú Å×À̺íÀ» Âü°í·Î ÇÑ´Ù.
3) Xenopus ¹è¿¡ ´ëÇÑ ½½¶óÀ̵åÇ¥º»ÀÇ °üÂû
early cleavage, late cleavage, blastula, blastocoel, dorsal lip, gastrula, involution, late yolk plug, late neural tube, late neural groove, 4mm, 5-7mm, 10mm, ammocoetes,
4) »ì¾ÆÀÖ´Â Xenopus ¹è¾ÆÀÇ °üÂû
Á©¸®ÃþÀÌ Á¦°ÅµÈ ¹è¸¦ Steinberg's solution (pH 7.4)¿¡ ³Ö°í °üÂûÇÑ´Ù. ¼öÁ¤¶õ, 2 ,4, 8, 16, »ó½Ç±â, Æ÷¹è±â, ³¶¹è±â, ½Å°æ¹è, ´«ÀÇ Çü¼º, ½ÉÀåÀÇ ¹Úµ¿, ¼Òȱâ°üÀÇ Çü¼º, ²¿¸®ÀÇ ÅðÈ°úÁ¤ µîÀ» °üÂûÇÑ´Ù. ¾ç¼·ùÀÇ ¹ß»ý ´Ü°èÀÇ ´ë·«ÀûÀÎ ½Ã°£ ¹× Ư¡Àº Ç¥¿Í ±×¸²À» ÂüÁ¶ÇÑ´Ù.
5) Á©¸®ÃþÀÇ Á¦°Å
¨ç Á©¸®ÃþÀÌ ºÎǬ ¼öÁ¤¶õÀ» 50ml ½ÃÇè°ü¿¡ ¿Å°Ü dejelly solutionÀ» ³Ö°í 3-5ºÐ°£ °¡º±°Ô Èçµç´Ù. ¨è Á©¸®ÃþÀÌ Á¦°ÅµÈ ¼öÁ¤¶õÀº 10% ¶Ç´Â 20% Steinberg solutionÀ¸·Î ÃæºÐÈ÷ ¼¼Ã´ÇÑ´Ù. ¨é Á©¸®ÃþÀÌ Á¦°ÅµÈ ¼öÁ¤¶õÀ» petri dish¿¡ ³Ö°í °üÂûÇÑ´Ù.
4. °á °ú
1) ÇغÎÇö¹Ì°æÇÏ¿¡¼ Ç¥º»°ú Àΰø¼öÁ¤À» ½ÃŲ ¹è¾ÆÀÇ ¹ß»ý °úÁ¤À» Àû´çÇÑ ½Ã°£º°·Î °üÂûÇÏ¿© ±× Ư¡À» ±â¼úÇÏ°í, ½ºÄÉÄ¡ÇÑ´Ù. 2) ±¤ÇÐÇö¹Ì°æÀ¸·Î ÁغñµÈ ½½¶óÀ̵å Ç¥º»À» °üÂûÇÏ°í, ¹èÀÇ ³»ºÎ ±¸Á¶ ¹× ¹ß»ý ´Ü°è¿¡ µû¸¥ ±¸Á¶ÀÇ º¯È¸¦ ½ºÄÉÄ¡ÇÏ°í, ±× Ư¡À» ±â¼úÇÑ´Ù. 3) ³È²Àº ¾îµð¿¡¼ °üÂûµÇ´Â°¡? 4) ¹Ì¼öÁ¤¶õ°ú ¼öÁ¤¶õÀº ¾î¶°ÇÑ Â÷ÀÌ°¡ Àִ°¡? 5) ¹Ì·¡ÀÇ µî¸é(dorsal)°ú º¹¸é(ventral)À» ¼öÁ¤¶õ-Æ÷¹è±â ½Ã±âÀÇ ¹è¾Æ·ÎºÎÅÍ ±¸º°ÇÒ ¼ö Àִ°¡? 6) µ¿¹°¹Ý±¸(animal hemisphere)¿Í ½Ä¹°¹Ý±¸(ventral hemisphere) Áß ¾îµð¿¡¼ Á» ´õ ÀÛÀº ÇÒ±¸°¡ °üÂûµÇ´Â°¡? ÀÌ¿¡ ´ëÇÑ ÀÌÀ¯´Â ¹«¾ùÀ̶ó°í »ý°¢Çϴ°¡? 7) Æ÷¹è±âÀÇ ÇÒ±¸¸¦ ÀνÄÇÒ ¼ö Àִ°¡? °íÁ¤µÈ ¹è¾Æ¿Í ÀýÆíÇÑ slide Ç¥º»À» ºñ±³ÇÒ ¶§ ¾î¶°ÇÑ Â÷ÀÌÁ¡ÀÌ Àִ°¡? ½½¶óÀ̵å Ç¥º»À¸·ÎºÎÅÍ µ¿¹°±ØÀÇ ¼¼Æ÷µéÀº ¾à ¸î °³ÀÇ ¼¼Æ÷ÃþÀ¸·Î µÇ¾î Àִ°¡? 8) ³¶¹è°¡ ÀϾ´Â ¹Ù·Î À§ Áö¿ªÀ» ¹«¾ùÀ̶ó°í Çϴ°¡? 9) ³¶¹è°¡ ÁøÇàµÇ¸é¼ ³È²ÀÌ Æ¢¾î ³ª¿Â °Íó·³ º¸À̴µ¥ ÀÌ·¯ÇÑ ±¸Á¶¸¦ ¹«¾ùÀ̶ó°í Çϴ°¡? 10) ±â°ü Çü¼º¿¡ ´ëÇÏ¿© °íÁ¤µÈ Ç¥º»À» ÂüÁ¶ÇÏ¿© ¼³¸íÇϽÿÀ. 11) äÁýÇÑ µµ·æ´¨ ¹× °³±¸¸® ¿ÃìÀÌÀÇ ¹ß»ý °úÁ¤ÀÇ Â÷ÀÌÁ¡Àº ¹«¾ùÀΰ¡?
5. °í Âû
1) °³±¸¸®ÀÇ ¹ß»ý°ú ÆÄÃæ·ù, Á¶·ù ¹× Æ÷À¯·ù¿ÍÀÇ ¹ß»ýÀÇ Â÷ÀÌÁ¡Àº ¹«¾ùÀΰ¡? 2) °³±¸¸®³ª µµ·æ´¨À» äÁýÇÏ¿© °üÂûÇÏ°íÀÚ ÇÏ¸é ¾î¶² ½Ã±â°¡ ÁÁÀº°¡? 3) ¾ç¼·ù°¡ ¹ß»ý °úÁ¤À» »ìÆ캸°Å³ª ¿¬±¸½Ã ÀåÁ¡Àº ¹«¾ùÀΰ¡? 4) ½Å°æ¹è Çü¼º °úÁ¤¿¡ ´ëÇÏ¿© ¼³¸íÇϽÿÀ. 5) programmed cell deathÀÇ ºÐÀÚ¼¼Æ÷ÇÐÀû Ư¡Àº ¹«¾ùÀΰ¡? 6) MPF¸¦ ¿¹·Î µé¾î°¡¸ç ¼¼Æ÷ºÐ¿ÀÇ ±âÀÛ¿¡ ´ëÇÏ¿© ¼³¸íÇϽÿÀ. 7) ¼º¼÷ÇÑ ³ÀÚ°¡ ¼öÁ¤ÀÌ µÇ¸é °¨¼öºÐ¿À» ¿Ï¼ºÇÏ°í À¯»çºÐ¿·Î µé¾î°£´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ º¯È¿¡ ´ëÇÑ ºÐÀÚÀûÀÎ ±âÀÛÀº ¹«¾ùÀΰ¡?
6. Âü°í¹®Çå
¨ç Wolpert, L. et al., (1998) Principles of development. P26-31, P63-70, P75-77, P81-93 P113-117 ¨è Gilbert, S.F. (1997) Developmental Biology. 5th edition. P2-5, P147-149, P173-175, P196-201, P221-232, P256, P600-629 www.swarthmore.edu/.../img_frog/ Xenopus_stage.jpg |